Cómo apoya un proyecto
La selección parte del par exacto, matriz, concentración, tiempo y estabilidad de ambos grupos. Bioortogonal no significa que todo reactivo sirva para toda muestra.
Elegir un par concreto
SPAAC une azida y ciclooctino sin cobre; IEDDA suele unir tetrazina y TCO; CuAAC une azida y alquino terminal con cobre y exige revisar catalizador, ligando, reducción, eliminación y compatibilidad.
La velocidad es solo una variable. Estabilidad, hidrólisis o isomerización, tamaño, hidrofobicidad, interacciones no específicas, concentración y estabilidad del producto afectan el flujo. El derivado exacto importa.
Flujo habitual del par reactivo
Definir ambos componentes
Identificar biomolécula, superficie, material, marcador o carga y los grupos que deben conservar función.
Elegir grupos complementarios
Seleccionar azida-ciclooctino, tetrazina-TCO, azida-alquino terminal u otro par validado.
Asignar cada grupo
Considerar tamaño, hidrofobicidad, síntesis, almacenamiento, exposición y efecto sobre la función.
Definir instalación
Especificar sitio o distribución, espaciador, protecciones, orden y purificación.
Reaccionar con controles
Fijar estequiometría, concentración, medio, pH, temperatura, tiempo y controles negativos.
Caracterizar producto y función
Confirmar conversión, identidad, componentes libres, subproductos, sitio, estabilidad y función.
Información necesaria antes de seleccionar
Entorno
Tampón, lisado, célula viva, superficie, polímero, partícula u otra matriz y sus condiciones.
Partners
Identidad, sitios, cantidad, formulación, tamaño y sensibilidad a cobre, reductores, solvente, luz u oxidación.
Cinética
Concentraciones, tiempo admisible, ventana de marcaje y método de medida.
Estabilidad de grupos
Vida útil, almacenamiento, exposición acuosa e isomerización, reducción, oxidación, hidrólisis o reacción inespecífica.
Plan analítico
Instalación, conversión, reactivos libres, identidad, sitio, estabilidad y función.
Alcance de la plataforma
La plataforma cubre bloques de síntesis azida, alkyne, ciclooctino, tetrazina, TCO y planificación. No afirma bioortogonalidad universal, velocidad en la matriz, conversión cuantitativa, especificidad, compatibilidad celular, imagen, actividad, seguridad ni uso clínico o regulatorio.
Consideraciones clave
- Selección de grupos SPAAC
- Planificación de pares IEDDA
- Grupos para marcaje e inmovilización
Catálogo y páginas técnicas relacionadas
Fuentes
- 1.A strain-promoted [3 + 2] azide-alkyne cycloaddition for covalent modification of biomolecules in living systems (Journal of the American Chemical Society, 2004)
- 2.Copper-free click chemistry for dynamic in vivo imaging (Proceedings of the National Academy of Sciences, 2007)
- 3.Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse-electron-demand Diels-Alder reactivity (Journal of the American Chemical Society, 2008)
- 4.Conformationally Strained trans-Cyclooctene with Improved Stability and Excellent Reactivity in Tetrazine Ligation (Chemical Science, 2014)