Wie dies ein Projekt unterstützt
Die Auswahl beginnt mit exaktem Reaktionspaar, Matrix, Konzentration, Zeit und Stabilität beider Handles. Bioorthogonal bedeutet nicht für jede Probe geeignet.
Ein konkretes Reaktionspaar wählen
SPAAC verbindet Azid und Cyclooctin ohne Kupfer; IEDDA meist Tetrazin und TCO; CuAAC verbindet Azid und terminales Alkin mit Kupfer und erfordert Prüfung von Katalysator, Ligand, Reduktion, Entfernung und Verträglichkeit.
Geschwindigkeit ist nur eine Variable. Stabilität, Hydrolyse oder Isomerisierung, Größe, Hydrophobie, unspezifische Wechselwirkungen, Konzentration und Produktstabilität beeinflussen den Ablauf. Das konkrete Derivat ist entscheidend.
Typischer Ablauf
Beide Partner definieren
Biomolekül, Oberfläche, Material, Reporter oder Payload und funktionserhaltende Gruppen angeben.
Komplementäre Handles wählen
Azid-Cyclooctin, Tetrazin-TCO, Azid-terminales Alkin oder anderes validiertes Paar auswählen.
Handles zuordnen
Größe, Hydrophobie, Synthese, Lagerung, Exposition und Funktionseinfluss berücksichtigen.
Installation definieren
Stelle oder Verteilung, Spacer, Schutzgruppen, Reihenfolge und Reinigung festlegen.
Mit Kontrollen reagieren
Stöchiometrie, Konzentration, Medium, pH, Temperatur, Zeit und Negativkontrollen festlegen.
Produkt und Funktion prüfen
Umsatz, Identität, freie Partner, Nebenprodukte, Stelle, Stabilität und Funktion bestätigen.
Benötigte Angaben vor der Auswahl
Umgebung
Puffer, Lysat, lebende Zelle, Oberfläche, Polymer, Partikel oder andere Matrix mit Bedingungen.
Partner
Identität, Stellen, Menge, Formulierung, Größe und Empfindlichkeit gegenüber Kupfer, Reduktion, Lösungsmittel, Licht oder Oxidation.
Kinetik
Konzentrationen, zulässige Zeit, Markierungsfenster und Messmethode.
Handle-Stabilität
Haltbarkeit, Lagerung, Wasserexposition und Risiken durch Isomerisierung, Reduktion, Oxidation, Hydrolyse oder Nebenreaktion.
Analytik
Installation, Umsatz, freie Reagenzien, Identität, Stelle, Stabilität und Funktion.
Umfang der Plattform
Die Plattform umfasst Azid-, Alkin-, Cyclooctin-, Tetrazin- und TCO-Bausteine sowie Planung. Universelle Bioorthogonalität, Reaktionsrate in der Matrix, quantitativer Umsatz, Ortsselektivität, Zellverträglichkeit, Imaging, Aktivität, Sicherheit oder klinische/regulatorische Nutzung werden nicht behauptet.
Zentrale Überlegungen
- SPAAC-Handle-Auswahl
- IEDDA-Reaktionspaarplanung
- Handles für Markierung und Immobilisierung
Zugehörige Katalog- und Technikseiten
Quellen
- 1.A strain-promoted [3 + 2] azide-alkyne cycloaddition for covalent modification of biomolecules in living systems (Journal of the American Chemical Society, 2004)
- 2.Copper-free click chemistry for dynamic in vivo imaging (Proceedings of the National Academy of Sciences, 2007)
- 3.Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse-electron-demand Diels-Alder reactivity (Journal of the American Chemical Society, 2008)
- 4.Conformationally Strained trans-Cyclooctene with Improved Stability and Excellent Reactivity in Tetrazine Ligation (Chemical Science, 2014)