プロジェクトへの支援内容
標識計画では、標的分子、反応可能部位、標識分子、標識量、精製法、標識後も目的の機能を保つことを確認する試験を定義します。
コンジュゲーションとプローブ性能を分ける
NHS ester、maleimide、azide-cyclooctyne、tetrazine-TCO は、選択性、条件、反応速度、安定性、サイズ、生成物の不均一性が異なります。標的の官能基と必要な部位制御に基づいて反応を選びます。
共有結合の形成だけでは画像・分析への適合性を示せません。標識度と分布、遊離 標識分子、凝集、結合、信号、背景、安定性を最終コンジュゲートで測定します。抗体研究では標識数の増加が活性抗体の割合を下げる場合があります。
一般的な標識ワークフロー
標的と読み出しを定義
タンパク質、ペプチド、オリゴ、脂質、ポリマー、粒子、表面と、予定する試験を示します。
反応部位を整理
amine、thiol、azide、alkyne、cyclooctyne、tetrazine、TCO、tag、導入残基と重要位置を記録します。
標識分子 と反応対を選択
正確な 色素、biotin、親和性 tag、キレート剤 などを定義し、条件に合わせます。
標識量を設定
目標標識度または占有率と試薬当量範囲を設定します。最大負荷が最適とは限りません。
反応と精製
反応順序、反応停止、遊離 標識分子 除去、緩衝液 交換、光、感受性基を管理します。
最終プローブを評価
同一性、純度、標識比と分布、遊離 標識分子、凝集、信号、結合または機能、安定性を測定します。
材料選定前に必要な情報
標的分子
同一性または構造、濃度、量、製剤、官能基、pH、溶媒、温度、金属、光への感受性。
部位と標識量
ランダムまたは部位特異的戦略、標識数、保護位置、許容不均一性。
標識分子
正確な 色素、biotin 誘導体、親和性 反応性官能基、キレート剤 など。励起・発光波長だけでは物質を特定できません。
反応・精製制約
緩衝液、添加剤、溶媒、濃度、温度、時間、精製法、最終製剤。
受入試験
標識比、純度、遊離 標識分子 限度、機能保持、信号対背景、安定性。
本ページの範囲
本ページは反応性ハンドル、スペーサー 付き試薬、色素/biotin 対応中間体、カスタム標識前駆体を対象とします。収率、部位特異性、標識度、蛍光性能、結合保持、解像度、診断用途、in vivo 適合性、安全性、規制状態を示すものではありません。
関連する製品カタログと技術ページ
参考文献
- 1.A strain-promoted [3 + 2] azide-alkyne cycloaddition for covalent modification of biomolecules in living systems (Journal of the American Chemical Society, 2004)
- 2.Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse-electron-demand Diels-Alder reactivity (Journal of the American Chemical Society, 2008)
- 3.Fluorescent-labeled antibodies: Balancing functionality and degree of labeling (Analytical Biochemistry, 2010)
- 4.Site-Specific Fluorescent Labeling of Hemagglutinin-Specific Antigen Binding Fragment through Amine Chemistry Revealed by Mass Spectrometry (Analytical Chemistry, 2023)