プロジェクトへの支援内容
選択は正確な反応対、マトリックス、濃度、時間、両ハンドルの安定性から始めます。生体直交という名称だけで全試料に適するわけではありません。
具体的な反応対を選ぶ
SPAAC は azide と cyclooctyne を無銅で、IEDDA は通常 tetrazine と TCO を、CuAAC は azide と terminal alkyne を銅触媒で結合します。CuAAC では触媒、リガンド、還元、除去、適合性も検討します。
速度は一要素です。安定性、加水分解や異性化、サイズ、疎水性、非特異相互作用、濃度、生成物安定性も工程に影響します。具体的な誘導体の指定が必要です。
一般的な反応対ワークフロー
両方の 相手分子 を定義
生体分子、表面、材料、標識分子、ペイロード と保持すべき機能基を示します。
相補ハンドルを選択
Azide-cyclooctyne、tetrazine-TCO、azide-terminal alkyne などを選びます。
各ハンドルを割り当て
サイズ、疎水性、合成、保存、暴露時間、機能への影響を考慮します。
導入法を定義
部位または分布、スペーサー、保護基、順序、精製を定めます。
対照付きで反応
当量、濃度、媒体、pH、温度、時間、陰性対照を定めます。
生成物と機能を評価
変換、同一性、遊離 相手分子、副生成物、部位、安定性、機能を確認します。
選定前に必要な情報
反応環境
緩衝液、ライセート、生細胞、表面、ポリマー、粒子 などと条件。
相手分子
同一性、部位、量、製剤、サイズ、銅、還元剤、溶媒、光、酸化への感受性。
速度要件
濃度、許容時間、標識 範囲、測定法。
ハンドル安定性
保存期間、形態、水相暴露、異性化、還元、酸化、加水分解、副反応。
分析計画
導入、変換、遊離試薬、同一性、部位、安定性、機能。
本プラットフォームの範囲
本プラットフォームは azide、alkyne、cyclooctyne、tetrazine、TCO ビルディングブロックと計画を対象とします。普遍的な生体直交性、マトリックス 内速度、定量変換、部位特異性、細胞適合性、画像性能、活性、安全性、臨床・規制利用は保証しません。
主な検討事項
- SPAAC ハンドル選択
- IEDDA 反応対設計
- 標識と固定化ハンドル
関連する製品カタログと技術ページ
参考文献
- 1.A strain-promoted [3 + 2] azide-alkyne cycloaddition for covalent modification of biomolecules in living systems (Journal of the American Chemical Society, 2004)
- 2.Copper-free click chemistry for dynamic in vivo imaging (Proceedings of the National Academy of Sciences, 2007)
- 3.Tetrazine ligation: fast bioconjugation based on inverse-electron-demand Diels-Alder reactivity (Journal of the American Chemical Society, 2008)
- 4.Conformationally Strained trans-Cyclooctene with Improved Stability and Excellent Reactivity in Tetrazine Ligation (Chemical Science, 2014)